核酸纯化技术全指南：DNA与RNA纯化方法与产品对比
DNA纯化技术
DNA纯化的核心目的
DNA纯化旨在从生物样本中分离高质量基因组DNA、质粒DNA或PCR产物，去除蛋白质、RNA、脂质等杂质，为下游应用（如PCR、测序、克隆）提供符合要求的核酸模板。
常见DNA纯化方法
1. 有机溶剂法（苯酚-氯仿抽提）
原理：利用DNA（水相）、蛋白质（有机相）和脂质（中间层）在有机溶剂中的溶解度差异实现分离。
优点：可获得完整高分子量DNA，成本低
局限：使用有毒有机溶剂，操作复杂易出错，耗时长，难以自动化；
2. 离心柱法（硅胶膜吸附）
原理：硅胶膜在高盐条件下特异性吸附DNA，离心去除杂质，低盐缓冲液洗脱。
优点：DNA纯度高(OD260/280≈1.8)，操作简单，无毒性溶剂；
局限：大片段DNA易断裂，低浓度样本回收率低，硅胶膜可能堵塞，不适用高通量自动化；
3. 磁珠法（自动化首选）
原理：表面修饰磁珠在高盐低pH条件下通过疏水作用/氢键结合DNA，磁场分离后洗脱。
优点：操作快速无需离心，适配自动化平台，高通量处理能力，无有机溶剂安全环保；
局限：大片段DNA回收率较低，磁珠残留可能影响下游实验，对粘稠样本处理效果不佳；
圣尔DNA纯化产品对比
| 产品 | 产品编号 | 技术原理 | 适用DNA片段 | 回收率 | 洗脱体积 | 适用样本 | 优势场景 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| PCR 产物纯化回收试剂盒 | SB-208 | 离心柱法 | 100bp-50kb | 85%以上 | ≥30μL | PCR产物 | 操作流程快速； 可回收多种DNA类型（ss/ds/环状） |
|
大圣琼脂糖凝胶回收/PCR纯化试剂盒 |
SB-HDP209 | 离心柱法 | 100bp-40kb | 85% | ≥25μL | 琼脂糖凝胶DNA条带、PCR产物、酶切片段 | 进口吸附膜质量稳定； 黄绿色溶胶液便于观察pH； 不含抑制下游反应的物质 |
| 大圣微量DNA凝胶/PCR产物回收试剂盒（通用型） | SB-HDP210 | 离心柱法 | 100bp-40kb | 85%-95% | 10-30μL | 微量DNA样本（凝胶、PCR、酶切、探针标记、DNA浓缩） | 微量洗脱（可低至10μL）; 溶胶/结合液二合一设计； 特殊无垫圈离心柱设计 |
| 大圣琼脂糖凝胶回收试剂盒 | SB-DS202 | 离心柱法 | 100bp-40kb |
85% |
≥25μL | 琼脂糖凝胶DNA条带 | 进口特制吸附膜确保高纯度回收 |
DNA纯化应用场景
DNA提取之后： 去除蛋白质、RNA、细胞碎片等杂质，用于PCR、测序、克隆等
PCR反应之后： 去除引物、dNTPs、Taq酶等，用于克隆、测序
限制性酶切之后： 去除限制性内切酶和高浓度盐离子，用于连接反应
凝胶电泳回收后： 去除琼脂糖、核酸染料、电泳缓冲液盐分
RNA纯化技术
RNA纯化的核心目的
RNA纯化需快速分离完整RNA并有效抑制RNase，去除基因组DNA、蛋白质及抑制剂，确保下游RT-qPCR、转录组测序等结果的准确性。
常见RNA纯化方法
1. 苯酚/氯仿法
原理：有机相分离RNA（水相），异丙醇沉淀回收，需低温操作保护RNA。
优势：可同步提取RNA/DNA/蛋白质；成本低；可获得高质量RNA
局限：使用有毒有机溶剂；需要精确分层操作；耗时长；难以自动化
2. 离心柱法
原理：硅胶膜在高盐条件下结合RNA，离心去杂质，DNase处理去除DNA，低盐洗脱RNA
优势：无毒性；性价比高；RNA纯度高，无DNA污染
局限：小RNA回收率较低；低浓度样本回收率低；成本高；不适合高通量自动化
3. 磁珠法
原理：二氧化硅或oligo(dT)包被磁珠捕获RNA，磁场分离。
优势：操作快速；适配自动化平台；高通量处理能力；小RNA回收率高
局限：成本高；磁珠残留可能影响下游实验；需要磁力架
圣尔RNA纯化产品对比
| 产品 | 产品编号 | 技术原理 | 结合能力 | 最小洗脱体积 | 纯化RNA长度 | 主要应用 | 优势场景 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 微量RNA纯化试剂盒（不含DNaseⅠ） | SB-R025 | 离心柱法 | 10μg | 6-10μL | ＞40 nt | 酶反应后微量RNA纯化 |
可实现高纯度RNA纯化； 适用于微量RNA纯化，支持低量洗脱 |
| 小量RNA纯化试剂盒（不含DNaseⅠ） | SB-R027 | 离心柱法 | 50μg | ≥20μL | ＞40 nt | 体外转录产物、RNA capping和DNase处理后的纯化 | 适用于小量RNA纯化 |
| Oligo（dT）22磁珠 | SB-YX001 | 磁珠法 |
2~3 μg mRNA /mg磁珠 |
/ | / | 从细胞或总RNA中分离高纯度mRNA，适用于RT-qPCR、cDNA文库构建等下游实验 | 高效，纯化过程中不损失mRNA |
RNA纯化应用场景
RNA测序（RNA-seq）： 要求完整RNA文库，微量DNA或降解RNA会导致数据偏差
qRT-PCR： 基因组DNA污染易产生假阳性，需DNase处理
Northern Blot： RNA降解会致条带模糊，蛋白质残留干扰杂交信号
cDNA文库构建： 不纯RNA降低逆转录效率，影响文库多样性
核酸纯化常见问题解答
离心柱法和磁珠法通常包含RNase处理步骤。有机溶剂法（如TRIzol）通过分相自然分离，水相含RNA，中间层含DNA。
所有方法均需DNase I处理（柱上消化或溶液处理）。qPCR实验建议跨内含子设计引物。
磁珠法通量高（96孔板）、易自动化、减少移液步骤，对复杂样本（粪便、植物）耐受性更好，减少离心剪切风险。
可通过以下方法评估：
- 分光光度计检测OD260/280比值（理想值1.8~2.0）
- 琼脂糖凝胶电泳观察DNA完整性
- 荧光定量仪精确测定浓度
- 下游实验验证（如PCR扩增效率）
Q5：RNA纯化中如何有效防止RNase污染？
- 全程戴手套并频繁更换；
- 使用RNase-free的枪头、离心管等耗材；
- 使用DEPC处理的水配制溶液；