Taq PCR Mix的浓度为2×,使用方便快捷,能减少PCR操作过程中的污染,使用时只需取适量2×Taq PCR Mix (+Dye),加入模板和引物,并加入ddH2O补足体积,使反应体系浓度为1×,即可进行PCR反应。PCR产物3'端带突出A碱基,纯化后可直接用于T/A克隆。
本Mix中含有Taq DNA聚合酶和一种含有3'→5'外切活性的蛋白,能够高效扩增≤7 kb的DNA片段,扩增产量高,配合优化后的反应缓冲液,可实现对不同GC含量(30%~70%)的高效扩增。此外,相较于WT-Taq,本Mix中的Taq酶延伸速度提高了2~4倍,可有效缩短反应时间。
本PCR Mix中包含两种染料,PCR产物无需添加Loading Buffer可直接点样电泳,且电泳过程中会出现蓝色和红色两个指示条带。该染料不影响PCR扩增效率,但对于需要对PCR产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验,建议在分析前对PCR产物进行纯化。
【使用方法】
a . 2× Taq PCR Mix需融解完全后使用,防止离子浓度不均匀 ;
b. 引物推荐终浓度为 0.2~0.4 μM,效果不佳时可以在 0.1~1μM 浓度范围内进行调整;
c. 以 50 μl 体系为例:模板为基因组DNA时,一般推荐的使用量为10~200ng;当模板为质粒或病毒DNA时,一般推荐的使用量为10pg~5ng。模板量过多时容易造成非特异性扩增。
d. 菌落PCR时预变性10 min,可充分破壁细胞,大肠杆菌或酵母菌均可高效扩增。
e. 退火温度请根据引物Tm值设置。如果需要,推荐通过建立温度梯度寻找引物与模板结合的最适温度。此外,退火温度直接决定扩增特异性,如发现扩增特异性差,可适当提高退火温度。
f. 目的片段长度<3kb,延伸时间可缩短至15s/kb;目的片段长度>3 kb , 延伸时间建议30 s/kb。若要达到最佳扩增效果或较高产量,推荐统一使用30 s/kb 速度延伸。
【储存条件及期限】
-20℃保存。蓝冰运输