飞敏™细胞活力检测试剂盒，是均质即用型试剂盒，用于定量检测活细胞中ATP的含量，从而间接测定活细胞的数量。本试剂盒细胞裂解和萤光素酶底物反应同步完成，无需先裂解后检测的双重步骤，保持了样本间反应体系的一致性，避免了因为频繁加样导致的误差。辉光信号强且持续时间长，具有灵敏度高、信噪比高、重复性好、稳定性好等优点，尤其适合高通量的肿瘤细胞增殖检测和化合物筛选。

【产品组成】

【实验步骤】

1. 细胞准备：

推荐使用96孔/384孔的白孔板或黑孔板。如使用透明96孔板，须特别注意在检测孔之间设置间隔孔，以减少邻近孔之间的相互干扰，或者将细胞移至不透明板完成检测。

对于贴壁细胞：

如果96孔板，保留培养液100 µL细胞/孔；如果384孔板，保留培养液25 µL细胞/孔。建议每个样本设置2-4复孔。

对于悬浮细胞：

如果96孔板，保留100 µL细胞/孔；如果384孔板，保留25 µL细胞/孔。建议每个样本设置2-4复孔。设置空白孔。

2. 标准曲线准备：

2.1 冰浴上融解ATP标准溶液(0.5mM)和ATP检测稀释液，把ATP标准溶液(0.5mM)用适当的稀释液配制成浓度梯度，用于稀释ATP的溶液主要成分最好和细胞悬液保持一致（如不含血清的DMEM），也可使用试剂盒自带的ATP检测稀释液。初次检测/预实验，建议使用0.1nM到10μM浓度梯度（按下列示意图），在后续/正式实验中，可以根据样品中ATP的浓度对标准品的浓度范围进行适当调整。

2.2 将不同浓度的ATP标准液加到待测孔板中。如果96孔板，100 µL/孔；如果384孔板，25 µL/孔。建议每个梯度设置2-4复孔。

3. 细胞活力检测

3.1 将对照或待测化合物加到适当的细胞孔中，根据优化的方法培养一定时间

3.2 将待测细胞在室温平衡20分钟

3.3 实验前将飞敏™即用型细胞ATP检测液平衡至室温

3.4 轻摇混匀试剂

3.5 加100 µl的试剂到100 µl 96孔板细胞中，或25 µl试剂到25 µl 384孔板细胞中

3.6 用加样枪上下混匀细胞，或在振板机上振荡2分钟

3.7 如果所用的细胞板为透明的细胞板，立即将细胞转到对应的不透明的白色细胞板里。如果细胞板是不透明的，则忽略此步骤

3.8 将细胞在室温避光孵育10-15分钟

注：虽然信号的半衰期超过2小时，我们建议您在加入试剂后10-15分钟读板以取得最好的线性和信噪比

3.9 检测孔板中的luminescence‌强度，需使用luminometer，即化学发光仪(检测萤光素酶报告基因时所用的仪器)。