【产品概述】

线性化聚乙烯亚胺（Polyethylenimine Linear，PEI）25000转染试剂是一种高电荷阳离子聚合物，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成复合物，并使该复合物进入细胞中。该转染试剂是一种瞬时转染试剂，细胞毒性低，转染效率高，，在HEK293、HEK293T和CHO等细胞中转染效率较高。多用于包装慢病毒、AAV病毒、逆转录病毒。也可以转染A549和Hela细胞等，但转染效率略低。该试剂与含血清的培养基兼容，能高效的将核酸导入细胞。

【溶解性】

溶于：热水，低pH的冷水，甲醇和乙醇。不溶于：苯，乙醚和丙酮

【操作步骤】

1）配置好的PEI溶液从-20℃拿出融化后，可放在4℃冰箱保存，绝不可重新冻存。

2）对大多数细胞来而言，每1μg DNA使用3μL PEI转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1μg DNA使用1.5~4 μL体积线性PEI转染试剂进行优化。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

【储液配置】

1.材料

PEI 25000、超纯水、12 mol/L盐酸（HCl）、10 mol/L氢氧化钠（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。

2.配置储存液（1 mg/mL）

1）于1 L玻璃烧杯，将1g PEI 25000粉末加入900 mL 超纯水中，在磁子搅拌器上搅拌均匀，产生小涡。

2）边搅拌边滴加入盐酸（12 mol/L）调节pH，直至pH＜2.0。

3）盖上烧杯顶部并搅拌3小时至完全溶解；整个过程要保持pH＜2.0。

【注】：可能会存在一些小纤维状颗粒不能溶解，这是正常现象。

4）边搅拌边滴加入NaOH（10 mol/L）调节pH，直至到6.9 ~7.1。

5）将溶液转入量筒内，并加水定容到1L。

6）用一次性0.1~0.2 µm PES真空过滤器过滤除菌，即得到1 mg/mL的储存液。

7）根据需要分装并储存在-20 °C，1年稳定。

【注】：储存液再次融化后，可置于4 °C保存，2周稳定，但绝不可重新冻存

【转染操作流程】

以6孔板为例：

1.接种细胞：为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，以转染时细胞密度在70%~80%为宜。

2.准备DNA-PEI复合物：按照以下体系配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物：

1）对于每孔细胞，使用100μL无血清培养基稀释2μg目的DNA，充分混匀成 DNA稀释液。

【注】：无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH2O

2）立刻向100μL的DNA稀释液中加入5μL的PEI 25000转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温下孵育10~25min，使得形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。

3.转染细胞：

1）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入2 mL新鲜预热的完全培养基。

2）直接将100μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。

3）37℃，5% CO₂培养箱培养，转染后最快7h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。

4.稳转筛选（可选）

转染24h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），37℃，5% CO₂培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

【参考用量】