快速核酸电泳缓冲液是常规的核酸电泳缓冲液如TAE或TBE缓冲液的升级换代产品。本产品对盐离子浓度敏感度低,允许在高达30V/cm的高电压进行电泳,产热少,分辨率高,电泳速度极快,可以在5~10分钟内完成电泳。
ü 快速高效:可耐受高电压、电泳时间短,可以在5~10分钟内完成电泳,比TAE/TBE快3倍。
ü 兼容性好:不影响后续的Southern杂交,DNA胶回收及DNA连接等反应。
ü 特别适合PCR片段,对短条带分辨率极高且带型锐利。
【使用方法】
每小袋可配2L工作液。用纯水配制1X缓冲液,除了需要使用较高电压才能得到快速的电泳结果外,其他操作跟使用 TAE 和 TBE 基本一样。
1)使用纯水按照产品包装规格的容积将快速电泳缓冲液制为1×快速电泳缓冲液。
2)使用快速电泳缓冲液配制琼脂糖凝胶,也可用TAE或TBE缓冲液配制凝胶。
3)使用快速电泳缓冲液进行电泳。应优化电压。
4)染料可加入快速电泳缓冲液或凝胶内,观察核酸条带。
【注意事项】
A、电压:本产品既可以使用常规电压,也可以使用较高电高电压,只是使用常规电压时,其快速的优越性就体现不出来。使用较高电压时,由于各电泳槽结构不同,最佳电压需要稍做摸索。第一次最好将工作电压调到最高电压的80%左右,即平均25V/cm(电极距离)。对一般小胶,建议可以用250~350V跑5~10分钟;对大的电泳槽,建议可以用400~450V跑5~10分钟。每次根据电泳结果和缓冲液温度决定各电泳槽的最佳工作电压和时间。正常情况下电压越高,电泳时间越短(注意:若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。缓冲液电泳次数超过3次或缓冲液中有细菌/真菌生长也会出现此现象,需要更换新的缓冲液。)
B、胶的浓度:建议将琼脂糖凝胶的浓度控制在0.8%~1.0%左右,对于长度在100 bp以下的DNA片段,可以将琼脂糖凝胶的浓度提高到1.2%左右。由于每次溶胶过程中会丢失水份,所以最好在溶胶后适当补充水份,否则胶浓度会逐渐增加,DNA移动速度会降低、产热会增加。使用0.8%左右的琼脂糖凝胶的好处是一方面可以节约胶的用量,另一方面可以使DNA的泳动速度更快,同时还能够提高DNA的回收率。
C、染色:如果使用EB,最好把染料加入到电泳缓冲液中或/和电泳上样液中,但也可以加入到融化后的凝胶中,只是EB的终浓度最好为0.4~0.5ug/mL(比使用TAE和TBE时稍高)。如果只有胶中有染料,则长时间电泳后(超过20分钟),大部分染料在高压下会与DNA分离,DNA条带可能会看不见或看起来很淡,此时应该再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(终浓度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。本产品与SYBR Green也有良好的兼容性,可以结合使用。
D、DNA条带扭曲:DNA样品中所含SDS量过高时(SDS主要来于上样液),DNA条带将出现扭曲,影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液。已经用TAE或TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶可以直接放入1X缓冲液中按上述电泳条件电泳,但有时候会有扭曲现象。
【储存条件及期限】
常温