【产品简介】
T7 DNA 连接酶来源于 T7 噬菌体,它是一种 ATP 依赖型双链 DNA 连接酶,该酶可催化双链 DNA 相邻 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基基团之间形成磷酸二酯键。T7 DNA 连接酶可以有效地催化粘性末端和缺口的连接。 与 T4 和 T3 DNA 连接酶不同,T7 DNA 连接酶不能有效地催化平末端连接。因此,在实验过程中,当平末端和粘性末端同时存在时,仅需粘性末端发生连接,T7 DNA 连接酶是理想的选择。本公司T7 DNA ligase是重组表达,并经多步纯化制备的重组蛋白。
【产品详情】
浓度:100U/μL
活性测定条件:66 mM Tris-HCl,1 mM ATP,10 mM MgCl2,1 mM DTT,7.5% PEG 6000 (pH 7.6 @ 25℃),25℃ 温育。
活性定义:在 20 μL 1×T7 DNA 连接酶反应缓冲液中,25℃ 反应条件下,30分钟能使 50%的经 HindIII 消化的3μg λ DNA 片段 【相当于5´ 端浓度为 0.06 μM(150μg/mL)】连接所需的酶量,定义为 1U。NEB公司的1 单位指温度为25℃,20 μL1× T7 DNA ligase Buffer缓冲体系的反应条件下,30min内能连接50%的被Hind III消化的 100 ng λ DNA片段所需的酶量。因此,本公司 T7 DNA连接酶浓度是NEB公司T7 DNA连接酶浓度的30倍,与NEB的T3 DNA ligase的活性单位定义相当。
适用范围:限制性内切酶克隆、向dsDNA添加接头或适配器、线性DNA的环化、双链DNA中的缺口封接、定点诱变等。
【储存条件及期限】
-20℃保存24个月。