【产品简介】

Taq DNA Ligase是一种耐高温连接酶，它能催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5′-磷酸和3′-羟基之间形成磷酸二酯键。该催化反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶DNA完全配对，且两条寡核苷酸链之间没有间隙的条件下才会发生。因此，可以用于单碱基替换检测。Taq DNA Ligase以NAD+为辅酶因子，在45~65°C范围内均有活性。

【活性定义】

在50 μl反应体系中，45°C条件下温育15 min能使50 % 的1μg经BstEII消化的λDNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

【酶活检测条件】

将DNA底物（20ug/ml）和1×TaqDNALigase反应缓冲液45°C温育15 min，加入终止染液（50 % 甘油，50mM EDTA和溴酚兰）终止反应，70°C加热10 min后经0.7 % 琼脂糖凝胶电泳，由于连接反应，经BstEII消化的λDNA粘端在70°C温育后仍将保持在一起。

【质量控制】

核酸内切酶残留测试：在反应体系中加入超螺旋的DNA底物，孵育4h，经琼脂糖凝胶电泳，无肉眼可见的环状切口DNA出现。

核酸外切酶残留检测：将酶液与双链DNA底物在37°C温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

宿主检测：将酶液中残留的核酸经E.coli 16S rDNA特异性的TaqMan qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。

【使用方法】

①于冰上配制如下反应体系：

 ②充分混匀并瞬离，45°C温育15  min；

③加入终止液（50 % 甘油，50 mM EDTA和溴酚兰）终止反应，不可热失活。