【产品简介】

高保真Taq DNA连接酶是一种突变型的Taq DNA连接酶，较野生型具有较高的连接效率及高保真性，同时维持了野生型的基本功能，是一种耐高温连接酶，在37~75°C范围内均具有活性。Taq DNA连接酶以NAD⁺为辅酶因子催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5'-磷酸和3'-羟基之间形成磷酸二酯键，只对DNA切刻具有显著的活性。

【质量控制】

非特异性内切酶活性检测：将1 μl的本品与超螺旋质粒DNA在37°C温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。

DNase残留检测：将1 μl本品与双链DNA底物在37°C温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

RNase残留检测：将1 μl的本品与500 ngRNA在37°C温育1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测超过90 % 的RNA仍保持完整。

【使用方法】

推荐反应体系

 推荐反应条件：45~65°C反应15 min。

【注意事项】

1.反应条件：Taq高保真DNA连接酶的反应温度范围为37~75°C。对于某组给定的探针，最佳连接温育温度通常与探针退火区域Tm值相差5°C以内。同时在实际应用中，需要根据经验实现活性和保真度的最佳平衡。

2.对于经典的LDR检测，反应时间通常在10~60 min之间，其中15 min反应时间适用于多数应用。对于需要进行变性/退火/连接循环的检测，我们建议在95°C条件下变性30s~2 min，然后以探针组优化后的连接温度退火/连接1~5 min。

3.10×HiFi Taq DNA Ligase Buffer中含有NAD+作为辅因子，将其分装后储存在-80°C条件下，以便进一步延长NAD⁺辅因子的半衰期。反应Buffer从低温到室温解冻后，溶液中可能出现白色沉淀，可以用移液器吹打20~30次或者涡旋震荡溶解沉淀后再使用。若反应Buffer变棕色可以继续使用。

4.在通过凝胶电泳观察连接反应时，建议使用蛋白酶K进行产物处理后再进行电泳，以避免出现凝胶迁移