【产品简介】

Exonuclease I(E.coli)是单链特异性核酸外切酶，沿3'-5'方向降解单链DNA，释放5'-脱氧核糖核苷酸。ExoI对单链有很强的特异性，不会降解双链DNA和RNA。此外，也无法降解由磷酰基团或乙酰基团封闭了3'-OH末端的DNA单链。本产品是把ExoI基因(E.coli)在大肠杆菌中进行重组表达后，经多次纯化分离而得到的。

【活性定义】

1活性单位(U)是指以单链DNA为底物，37°C、1×ExoI缓冲液条件下，30 min内释放10 nmol酸溶性核苷酸所需的酶量。

【反应条件】

37℃温育 15~30 min。

【失活条件】

80℃温育 20 min。

【应用范围】

1.从PCR产物中去除引物和寡核苷酸：ExoI可去除PCR反应中未用完的引物以及扩增产生的多余的单链DNA。

2.去除核酸混合物中的ssDNA：ExoI可特异性地消化反应液中的ssDNA，而不会消化dsDNA和RNA。

3.ssDNA检测：ExoI可用于检测存在游离3'羟基的ssDNA。

【质量控制】

蛋白纯度：经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95 % 。

非特异性内切酶活性：37°C下，在20 μl反应体系中将100U Exonuclease I与200 ng超螺旋质粒DNA共同温育4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于20 % 的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

DNase活性：37°C下，在20 μl反应体系中将100U Exonuclease I与15 ng双链DNA片段共同温育16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA片段无变化。

【使用方法】

应用1 PCR反应产物中去除引物或其他单链残留

 注：配合虾碱性磷酸酶（SAP）用来去除残存的单核苷酸（dNTPs），之后不需要对PCR产物进行纯化，即可以进行测序反应。

反应条件：37℃温育 15~30 min。

失活条件：80℃温育 20 min。

应用2 单链DNA去除

 DNA mixture中的单链DNA不超过1 μg

反应条件：37℃温育 15~30 min。

失活条件：80℃温育 20 min。

【注意事项】

1. Exo I 可兼容绝大多数PCR体系，可直接在PCR产物中添加。纯化后的PCR产物可直接用于测序，但不推荐直接用于克隆。

2. Exo I 用于单独去除ssDNA的实验，推荐搭配10×Exo I Buffer 使用。

3. Exo I 不能切割双链DNA，因此含有二级结构的单链DNA 需要 变性后才能完全消化。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行 实验操作。