【产品简介】

T5 Exonuclease是一种核酸外切酶，沿5'→3'方向从双链或单链DNA的5'末端消化DNA，同时也可从线性或环状双链DNA的缺刻或缺口处对DNA进行消化。但T5 Exonuclease无法消化超螺旋DNA，此外，当溶液中的Mg2+浓度低于1mM时，T5 Exonuclease对单链DNA的消化活性也会受到抑制。因此，T5 Exonuclease尤其适用于从质粒中降解线性化与缺刻质粒、去除连接产物中的非环状DNA、无缝克隆(Gibson Assembly)等。

【活性定义】

1活性单位(U)是指以鲑鱼精DNA为底物，37°C,1×T5 Reaction Buffer条件下，每分钟使反应液A260变化0.00032所需的酶量。

【应用范围】

1.降解线性单链、双链DNA或缺刻质粒DNA。

2.去除环化双链DNA中的不完全连接产物。

3.去除碱裂法提取质粒过程中产生的变性质粒DNA，降解线性和缺刻质粒DNA，获得高纯度的超螺旋质粒DNA。

4.提高小提质粒cDNA文库的转染效率。

5.常用于Gibson组装(Gibson Assembly)。

【质量控制】

蛋白纯度检测：使用SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95 % 。

内切酶残留检测：将10U T5 Exonuclease与1μg超螺旋质粒DNA在37°C下，共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10 % 的质粒DNA转变成缺刻状态。

宿主DNA残留检测：使用大肠杆菌16S rDNA特异性引物，采用荧光定量PCR法检测10U T5 Exonuclease，大肠杆菌宿主基因组DNA残留低于1copy。

【使用方法】

加样体系：

 反应条件：37°C 30 min。

失活条件：80°C 20 min，或加入EDTA至终浓度为至少11 mM，或加入含SDS的DNA Loadi ng（SDS终浓度需0.08 % ）

【注意事项】

1.T5 Exonuclease是一种非特异性的DNA外切酶，对于不同类别的DNA有不同的反应速率，进行反应时应该注意选取合适的酶量和反应时间。

2.T5 Exonuclease在37°C拥有最佳反应活性，在50°C也具有一定活性，可用于Gibson组装。

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。