产品简介】

T7 EndonucleaseI(T7 EndoI,T7 EI)，中文名称T7核酸内切酶I，可识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或DNA分叉点、异源双链DNA，切割位点位于错配位点5'端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。此外T7EI也能以很慢的速度切割含有缺刻的双链DNA。值得注意的是，T7EI可以识别长度大于或等于2个碱基对( bp)的插入、缺失或突变导致的DNA错配，但不能识别1 bp的插入、缺失或突变。同时，T7 EndonucleaseI无法识别所有的DNA错配，对C错配的切割效果最佳。

本品为克隆重组T7 EndonucleaseI基因后在大肠杆菌中表达纯化获得的高纯度蛋白，不含其他内切酶或外切酶污染。

【活性定义】

1活性单位是指在50 μl体系中，37°C反应1h将1μg超螺旋十字形结构pUC(AT)的90 % 以上转换为线性结构所需的酶量。

【应用范围】

1.基因突变、SNP、TALEN或CRISPR/Cas9形成的突变体检测。

2.检测或切割异源双链DNA和切刻的DNA。

3.随机切割线性DNA进行鸟枪法克隆。

【质量控制】

蛋白纯度：经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95 % 。

非特异性内切酶活性：在20 μl反应体系中将10U T7 EndonucleaseI与200 ng的质粒DNA在37°C共同温育2h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于20 % 超螺旋质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

DNase活性：在20 μl反应体系中将10U T7 EndonucleaseI与15 ng的双链DNA片段在37°C共同温育2h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA片段无变化。