【产品简介】
HL-Uracil DNA Glycosylase(U ng,UDG)是冷水鱼来源重组热敏感的尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG），并经过多步纯化精制得到。与普通UDG相比，热敏UDG对温度更加敏感，室温下即可起作用，50°C以上即可失活。该酶能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基并释放游离尿嘧啶，常被用于消除PCR、qPCR、RT-qPCR扩增引起的气溶胶污染。
【活性定义】
在25°C,30 min内降解1μg含有尿嘧啶的dsDNA所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
【酶活检测条件】
单链DNA酶活性：将1U HL-Uracil DNA Glycosylase(U ng,UDG)与1pmol单链寡核苷酸（FAM标记）在37°C孵育16h，经毛细管电泳检测，降解率<5 % 。
【失活条件】
50°C温育5 min。
【质量控制】
核酸内切酶活性：将1U HL-Uracil DNA Glycosylase(U ng,UDG)与200 ng超螺旋质粒DNA在37°C下，共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10 % 的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
非特异性核酸酶活性：将1U HL-Uracil DNA Glycosylase(U ng,UDG)与15 ng双链DNA片段在37°C温育16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测双链DNA底物无变化。
RNase活性：将1U HL-Uracil DNA Glycosylase(U ng,UDG)总RNA在37°C温育1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测超过90 % 的RNA仍保持完整。
宿主DNA残留：使用大肠杆菌16SrDNA特异性引物探针组，采用荧光定量PCR法检测1U HL-Uracil DNA Glycosylase(U ng,UDG)，大肠杆菌宿主基因组DNA残留低于10copies。
【使用方法】
1.按下列体系配制PCR反应液
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试剂
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体积
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终浓度
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10× PCR Buffer for Taq (Mg2+ Plus)
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5 μl
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1×
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dUTP (10 mM)
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3 μl
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0.6 mM
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dCTP/ dGTP/ dATP (10 mM each)
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1 μl (each)
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0.2 mM
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Template DNA
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x ng
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-
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Primer 1 (10 μM)
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1 μl
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0.2 mM
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Primer 2 (10 μM)
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1 μl
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0.2 mM
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AbTaq DNA Polymerase (5 U/μl)
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0.2 μl
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0.05 U/μl
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Uracil DNA Glycosylase (UNG, UDG)
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1 μl
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0.05 U/μl
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ddH2O
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To 50 μl
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-
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a.根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2~0.6mM之间调整。
b.根据实验需要，50 μl反应体系的使用量一般为0.1~1U。
2.反应程序
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步骤
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温度
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时间
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降解含 U 模板
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25°C
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10 min
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UDG 失活，模板预变性
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95°C
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3 min
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变性
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95°C
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10 s
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退火
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55~65°C
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30 s
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延伸
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72°C
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30 s/kb
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终延伸
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72°C
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5 min
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注:可根据实验需要调整PCR反应程序。
【注意事项】
HL-Uracil DNA Glycosylase(U ng,UDG)在大多数PCR或RT-PCR体系中均具有活性，但对于自行使用的PCR或RT-PCR体系，首次使用时建议先测试一下是否和所使用的体系兼容。
【储存条件及期限】
于-20℃保存
