【产品简介】

本产品来源于极端耐热菌Pyrococcus abyssi(P.abyssi)，经重组表达纯化后获得。Thermostable RNaseHII是一种核酸内切酶，识别并切割RNA/DNA杂合链中的RNA链，不切割ssDNA、dsDNA，对单链RNA切割活性极低。Thermostable RNaseHII在单核糖核苷酸残基处从5'端进行切割，切割后产生一个5'端磷酸基团和一个3'端羟基。该Thermostable RNaseHII在60~80°C具有最佳活性，在37°C~95°C间均具有活性，在室温下活性低。本品极度耐热，95°C温育15 min后，几乎没有活性损失，可与PCR各反应体系兼容。

【活性定义】

一个单位（U）是指在60°C下，30 min切割100pmol含有单个核糖核苷酸的嵌合DNA/RNA杂交双链体底物所需的酶量。

【反应条件】

1×RHII Buffer；60°C温育。

【失活条件】

终浓度1 % SDS，95°C 15 min。

【应用范围】

1.RNase HII依赖性PCR(rhPCR)。

2.减少或去除PCR反应中的引物二聚体。

3.提高多重PCR产物的准确性。

4.区分异种同源基因。

5.SNP检测和稀有等位基因检测。

6.降解冈崎片段的RNA部分。

7.LAMP高灵敏度探针法检测。

8.与T7 EndoI一起使用时，在掺入的核糖核苷酸位点产生双链断裂。

【质量控制】

蛋白纯度：经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95 % 。

非特异性内切酶活性：37°C下，在20 μl反应体系中将2UThermostable RNaseHII与200 ng超螺旋质粒DNA共同温育4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于20 % 的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

DNase活性：37°C下，在20 μl反应体系中将2U Thermostable RNaseHII与15 ng双链DNA片段共同温育16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA片段无变化。

RNase活性：37°C下，在10 μl反应体系中将2U Thermostable RNaseHII与500 ng RNA共同温育1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，超过90 % 的RNA保持完整。

宿主DNA残留：采用中国药典2020版四部通则3407外源性DNA残留量测定法第三法定量PCR法，本品中大肠杆菌宿主细胞DNA残留量低于1拷贝/2U。

【使用方法】

1.以rhPCR流程为例：

（1）以PCR Master Mix(2×)使用为例：

 （2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

（3）设置PCR反应