【产品简介】

RNaseT1是一种来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)的核糖核酸内切酶，可特异性地在单链RNA的鸟嘌呤核糖核苷酸(G)后进行切割，产生3'磷酸末端。RNaseT1能够形成核苷2'，3'-环磷酸中间体，以切割3'-鸟苷残基与邻近核苷5'-OH基团之间的磷酸二酯键，产生含末端3'-GMP的寡核苷酸和3'-GMP。

RNaseT1的活性不依赖于金属离子。

【活性定义】

1活性单位(U)是指在37°C,pH7.5条件下，以酵母RNA为底物，使A260变化1.0所需要的酶量

【应用范围】

1.去除DNA中的RNA；

2.去除重组蛋白中的RNA；

3.RNA测序；

4.用于核糖核酸酶保护试验（与RNaseA结合使用）；

5.测定不含G或低G含量DNA模板的转录水平。

【质量控制】

蛋白纯度：经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95 % 。

非特异性内切酶活性：37°C下，在20 μl反应体系中将500U RNaseT1与200 ng超螺旋质粒DNA共同温育4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于20 % 的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。DNase活性：37°C下，在20 μl反应体系中将500U RNaseT1与15 ng双链DNA片段共同温育16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA片段无变化。

【使用方法】

1.反应体系

 注:为避免RNaseA等环境中的RNase污染使底物RNA降解，建议在反应体系中加入RNase Inhibitor，底物RNA应在RNase Inhibitor加入并混匀之后加入。

2.推荐的反应条件

37°C孵育15 min。可根据实际情况适当延长或缩短孵育时间以达到最佳酶切效果。

【注意事项】

1.多种金属离子可抑制RNaseT1的活性，包括Mg²⁺(100mM MgCl₂约抑制40 % 的活性)、Ca²⁺(10mM CaCl₂约抑制30 % 的活性)、Zn²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺等。除此之外，Guanylyl 2'-5'guanosine是RNaseT1的特异性抑制剂。

2.RNaseT1的热失活是可逆的，建议通过柱纯化或酚/氯仿抽提的方法去除RNaseT1。

3.在pH6.0的溶液中，RNaseT1可耐受100°C加热10 min；但在pH>9.0的碱性溶液中不稳定。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。