【产品简介】
Thermostable RNase T1是一种基于RNase T1经过蛋白定向进化得到的耐热突变体。与野生型RNase T1相比,Thermostable RNase T1能够在50°C的条件下保持100 % 的活性,而野生型在同样的温度下活性至少下降50 % 。更高的反应温度有助于充分打开RNA的二级结构,减少或避免其对酶切的影响,从而使酶切过程更加彻底。
【活性定义】
1活性单位(U)是指在37°C,pH7.5条件下,以酵母RNA为底物,使A260变化1.0所需要的酶量。
【应用范围】
1.去除DNA中的RNA;
2.去除重组蛋白中的RNA;
3.RNA测序;
4.用于核糖核酸酶保护试验(与RNaseA结合使用);
5.测定不含G或低G含量DNA模板的转录水平。
【质量控制】
蛋白纯度:经SDS-PAGE凝胶电泳检测,蛋白纯度不低于95 % 。
非特异性内切酶活性:37°C下,在20 μl反应体系中将500U Thermostable RNase T1与200 ng超螺旋质粒DNA共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于20 % 的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
DNase活性:37°C下,在20 μl反应体系中将500U Thermostable RNase T1与15 ng双链DNA片段共同温育16h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,双链DNA片段无变化。
【使用方法】
1.反应体系
试剂
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体积
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终浓度
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ssRNA
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1-10 μg
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50~500 ng/μl
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10× RNase T1 Buffer
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2 μl
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1×
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RNase Inhibitor (40 U/μl)
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1 μl
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2 U/μl
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Thermostable RNase T1 (500 U/μl)
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0.4 μl
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10 U/μl
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Nuclease-Free Water
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To 20 μl
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注:为避免RNaseA等环境中的RNase污染使底物RNA降解,建议在反应体系中加入RNase Inhibitor,底物RNA应在RNase Inhibitor加入并混匀之后加入。
2.推荐的反应条件
50°C孵育15 min。可根据实际情况适当延长或缩短孵育时间以达到最佳酶切效果。
【注意事项】
1.Thermostable RNase T1的热失活是可逆的,建议通过柱纯化或酚/氯仿抽提的方法去除Thermostable RNase T1。
2.RNase相关实验请在通风橱或特定区域进行,以避免对其他实验产生影响。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。
【储存条件及期限】
于-20℃保存