快速内切酶EagI
【产品介绍】
圣尔快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有快速内切酶在圣尔通用酶切Buffer或Color Buffer中都具有优良的活性，能够在5-15分钟内完成酶切。此外，圣尔生物去磷酸化、连接试剂在圣尔通用酶切Buffer中均具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。
Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
【识别序列】
C/GGCCG
【酶切位点】
5'...C ↓ G G C C G...3'
3'...G C C G G ↑ C ..5'
【保护碱基】
2
【同裂酶】
BseX3I, BstZI, EclXI, Eco52I
【反应温度】
37°C
【随酶Buffer】
10×圣尔通用酶切Buffer；10×圣尔Color Buffer
【失活条件】
80°C, 20 min
【甲基化敏感性】
Dam: no effect.；Dcm: no effect.；CpG: blocked.；EcoKI: no effect.；EcoBI: no effect.
【使用方法】
1 DNA快速酶切流程
1.1 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
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质粒DNA
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PCR产物
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基因组DNA
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ddH2O
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15 μL
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16 μL
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30 μL
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10×圣尔通用酶切Buffer（或10×圣尔Color Buffer）
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2 μL
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3 μL
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5 μL
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底物DNA
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2 μL（1 μg）
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10 μL（0.2 μg）
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10 μL（5 μg）
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快速内切酶
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1 μL
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1 μL
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5 μL
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总体积
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20 μL
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30 μL
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50 μL
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注：本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×圣尔通用酶切Buffer（或10×圣尔Color Buffer）加入量可适当减少至2μl。但由于PCR体系中，DNA聚合酶很可能同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。
1.2 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
1.3 37°C温育15 min（质粒），或15-30 min（PCR产物），或30-60 min（基因组DNA）；
1.4 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）；
1.5 如果使用圣尔Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2 双酶切或多酶切
2.1 每种快速内切酶的用量为1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；
2.2 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
2.3 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3 适用于质粒的扩大反应体系
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总体积
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20 μL
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20 μL
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30 μL
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40 μL
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50 μL
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DNA
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1 μg
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2 μg
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3 μg
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4 μg
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5 μg
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快速内切酶
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1 μL
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2 μL
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3 μL
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4 μL
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5 μL
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10×圣尔通用酶切Buffer（或10×圣尔Color Buffer）
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2 μL
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2 μL
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3 μL
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4 μL
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5 μL
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注：如果总反应体系大于20 μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
【缓冲液兼容性】
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圣尔通用酶切Buffer
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FastDigest Buffer
(Thermo Scientific)
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rCutSmart™ Buffer
(NEB)
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QuickCut™ Buffer
(Takara)
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活性
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100%
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100%
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100%
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100%
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