内切酶BstXI
【产品介绍】
内切酶BstXI属于Type IIP型限制酶,识别回文序列。经过优化的反应Buffer使BstXI最大限度发挥功能,同时反应缓冲液包含重组白蛋白,其可增强多种酶的稳定性。
【识别序列】
CCANNNNN/NTGG
【酶切位点】
5'...C C A N N N N N ↓ N T G G...3'
3'...G G T N ↑ N N N N N A C C...5'
【保护碱基】
Not Determined
【反应温度】
37°C
【随酶Buffer】
10×Buffer C
【失活条件】
80°C, 20 min
【甲基化敏感性】
Dam: no effect.;Dcm: impaired.;CpG: no effect.;EcoKI: no effect.;EcoBI: no effect.
【超长时间温育检测】
最适反应温度下,将10 U BstXI与1 μg λDNA共同温育16 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。
【使用方法】
1 DNA酶切流程
1.1 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
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50 μl体系
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ddH2O
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up to 50 μL
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10×Buffer C
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5 μL
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底物DNA
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1 μg
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内切酶BstXI (10 U/μl)
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1 μL
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注:DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐,否则将会影响酶活性
1.2 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
1.3 37°C温育15-60 min;
1.4 80°C温育20 min即可使酶失活,停止反应(可选);
【注意事项】
1 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%,避免酶中过多的甘油引起星号活性;
2 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA或乙醇等)相同,反应体积越小,酶切反应抑制效应越强。
【缓冲液兼容性】
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圣尔通用酶切Buffer
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FastDigest Buffer
(Thermo Scientific)
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rCutSmart™ Buffer
(NEB)
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QuickCut™ Buffer
(Takara)
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活性
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25%
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100%
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25%
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100%
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【储存条件及期限】
-20°C