内切酶BsrDI

【产品介绍】

BsrDI来源于Bacillus stearothermophilus D70，由大小两个亚基组成，属于异二聚体酶。BsrDI识别特定序列GCAATG/CATTGC，切割顶链时在识别位点下游2个核苷酸处，底链则在识别位点后直接切割，产生特定的黏性末端，属于TypeIIS型限制酶，可用于Golden gate组装。

【识别序列】

GCAATG (2/0)

【酶切位点】

5'...G C A A T G N N ↓...3'

3'...C G T T A C↑N N ...5'

【保护碱基】

Not Determined

【同裂酶】

Bse3DI, BseMI

【反应温度】

37°C

【随酶Buffer】

10×Buffer B

【失活条件】

80°C, 20 min

【甲基化敏感性】

Dam: no effect.；Dcm: no effect.；CpG: no effect.；EcoKI: no effect.；EcoBI: some blocked.

【超长时间温育检测】

最适反应温度下，将10 U BsrDI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

【使用方法】

1 DNA酶切流程

1.1 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

注：DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响酶活性

1.2 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

1.3 37°C温育15-60 min；

1.4 80°C温育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）；

【注意事项】

1 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

3 BsrDI可在10×圣尔通用酶切Buffer中使用，但星号活性明显强于在Buffer B中反应。若要使用圣尔通用酶切Buffer进行反应，不建议酶切时间超过3 h或者超过2 U的BsrDI/µg DNA底物。

【缓冲液兼容性】