【产品简介】

圣尔快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有快速内切酶在圣尔通用酶切Buffer或Color Buffer中都具有优良的活性，能够在5-15分钟内完成酶切。此外，圣尔生物去磷酸化、连接试剂在圣尔通用酶切Buffer中均具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

【识别序列】

GGWCC

【酶切位点】

5'...G ↓ G W C C...3'

3'...C C W G ↑ G...5'

【同裂酶】

Bme18I, Eco47I

【反应温度】

37℃

【失活条件】

80℃温育20 min

【质量控制】

功能活性检测

37℃下，在20 μL圣尔通用酶切反应体系中，1 μL快速内切酶AvaII 能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。

超长时间温育检测

37℃下， 在20 μL圣尔通用酶切反应体系中，将1 μL快速内切酶AvaII 与 1 μg λDNA 共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

37℃下，使用10倍酶量的快速内切酶 AvaII消化DNA底物，回收酶切产物，在22℃下使用T4 DNA Ligase (Fast)可以将超过95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开95%以上的连接产物。

【注意事项】

研究发现，部分 Type IIP 限制酶可以识别并切割 DNA-RNA 杂合链，AvaII 属于其中一种，但其切割杂合链的能力远低于切割 dsDNA 的能力。经圣尔验证，AvaII 切割杂合链需要超过切割相同摩尔数的 dsDNA 所需的至少 80 倍的酶量（文献参考值为 240 倍），若需要使用 AvaII 分析 RNA，建议根据实验需求自行调整酶切时间和反应体系。。