由于磷酸化的化学计量比较低 ,因此磷酸肽的浓缩是成功进行磷酸蛋白质组学实验的关键步骤。传统的固定化金属离子亲和色谱(immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC) ,利用固定化的带正电荷的金属阳离子与带负电荷的磷酸基团之间的亲和力富集磷酸化肽段,这些金属离子通过螯合配体以非共价相互作用固定在支持基质(如磁珠) 上。然而,IMAC的性能容易受到生物样品中的许多分子,包括盐、去垢剂和其他小分子化合物的影响。PolyMAC (polymer-based metal ion affinity capture) 是一种金属离子(Ti4+和Fe3+) 可溶性纳米聚合物,它由金属离子和醛两种侧基组成,可用于富集磷酸化肽段。PolyMAC-磷酸化肽段复合物可以通过共价偶联固体支持物,如琼脂糖凝胶,从溶液中分离出来。与固相IMAC相比,PolyMAC可以在均相水溶液中富集磷酸化肽段,随后在固相载体上捕获磷酸化肽段,用于洗涤和磷肽洗脱。从而克服了固相结合的异质性,具有螯合时间快、可重复性高的特点。这种高度选择性的富集法可以用于大多数复杂样品,因为它提供了最佳的专属性和回收率。 PolyMAC 具有更好的重现性和磷酸化肽段的富集性,磷酸化肽段的选择性接近95% ,回收率>90%。重要的是,对于总蛋白磷酸化水平较低的样品 PolyMAC 具有非常好的回收率和选择性。
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