【产品简介】

RNA的剪接、修饰、翻译及非编码RNA对转录、剪接、翻译、RNA稳定性、蛋白活性、蛋白定位的调控，均依赖于RNA与蛋白质及其他RNA（包括miRNA）的相互作用。为了研究这些相互作用，从RNA起始的富集研究，通常需要对目标RNA或者其反义序列进行标记，并用标签进行成像或富集。然而，反义序列探针因非特异互补配对，在线性RNA相互作用中会引起背景过高。因此，常需对RNA进行直接标记。常见的RNA标记方法有放射性同位素标记碱基替代法、非放射性标签修饰碱基替代法和末端标记法。放射性同位素标记碱基替代法常用于northern blotting，但受限于实验场所且操作难度较高。非放射性标签碱基替代法可避免放射性带来的危害，但标签碱基随机插入会破坏RNA的高级结构，而RNA功能及其相互作用又高度依赖于RNA的空间构象。相比至下，RNA末端生物素标记法，可在基本不干扰RNA高级结构的前提下，高效标记线性RNA 3'末端。本试剂盒采用优化的寡RNA生物素修饰探针，通过T4 RNA连接酶将其与线性RNA的3'末端高效连接。试剂盒组分包括T4 RNA连接酶反应体系、寡RNA生物素修饰探针、RNase抑制剂及连接增强试剂。

【产品应用】

末端生物素标记的RNA因不改变RNA高级结构，且含有的生物素标签便于富集与成像，已成为研究线性RNA与蛋白或RNA相互作用的常用技术。其主要应用场景包括：

1.使用链霉亲和素载体进行RNA pulldown，高效富集结合蛋白、RNA，通过质谱或测序鉴定目标RNA未知结合蛋白或RNA。

2.采用链霉亲和素载体进行RNA pulldown，富集目标RNA结合蛋白或RNA，通过Western blot或qPCR验证目标RNA已知结合的蛋白或RNA。

3.通过EMSA实验验证目标RNA和蛋白的相互作用。

4.通过生物膜干涉技术测定目标RNA与蛋白相互作用的亲和力常数。