脱脂牛奶封闭液

BSA封闭液

封闭原理

占据非目标结合位点,降低背景,提高WB特异性和灵敏度

封闭液选择原则

不与抗体或检测试剂发生交叉反应

使用浓度

5%脱脂奶粉

0.5-5%；推荐浓度5% BSA（TBST 配制,推荐使用圣尔TBS-T速溶颗粒#SB-CPR009）

使用方法

室温 1 h，或4℃过夜 。

特点优势

牛奶含有大量的蛋白质，其中一部分可以与非特异性结合位点结合，从而阻止非特异性结合。牛奶封闭通常用于常规的Western blot实验中，可以提供较好的背景抑制效果。

BSA相对于牛奶具有更低的背景信号，并且对一些特定的抗体和靶标具有更好的阻断效果。BSA封闭通常在特定的应用中使用，例如对某些蛋白质相互作用或低丰度蛋白的检测等情况下，可以提供更清晰的结果。

不适用情况

便宜，易于获得，适用范围相对BSA窄，碱性磷酸酶（AP）标记二抗及生物素-亲和素偶联系统不适用。

成分单一，适用于多数情况，不可封闭Fc受体（免疫球蛋白Fc部分c末端的受体），如有免疫原偶联BSA，则不可用。

磷酸化应用场景

奶粉含有酪蛋白（一种磷酸化蛋白），有可能出现背景深的现象。并且脱脂奶粉含磷酸酶，磷酸酶与膜上的磷酸化蛋白接触可使之去磷酸化，用磷酸化特异性抗体分析磷酸化蛋白时会受到影响。

做磷酸化蛋白的western时使用BSA（牛血清蛋白）作为封闭液