细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解,这种降解非常特异并有规律,所产生的不同长度的 DNA 片段约为 180 bp-200 bp 的整数倍,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状 Ladder 图谱,本试剂盒采用 TUNEL 法,应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)在凋亡细胞断裂 DNA 的 3´-OH 末端催化掺入生物素(Biotin)标记的 dUTP (Biotin-X-dUTP)。随后和辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的 Streptavidin (Streptavidin-HRP) 特异结合,最后在 HRP 的催化下通过 DAB 显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜观察并计数凋亡细胞。由于正常的或正在增值的细胞几乎没有 DNA 的断裂,因而没有 3´-OH 形成,很少能被染色。TUNEL 法可以选择性的对凋亡细胞直接进行原位检测,而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞,是一种更快速、直接的检测手段。
注意事项
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 叠氮化钠对 HRP 有抑制作用,实验中请勿使用含有叠氮化钠的试剂。