【产品简介】

酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采用多聚HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤（HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-HRP二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复可实现多重标记。TSA详细原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基（包括色氨HRP 催化H₂O₂酸、组氨酸和酪氨酸残基）结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增强。简单来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后去检测结果。由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。也就是说，如果用TSA技术，同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的多聚HRP二抗就可以进行实验，而且信号放大的倍数大大增强。本公司开发的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：Tyramide-480，Tyramide-520，Tyramide-570，Tyramide-620，Tyramide-690，Tyramide-780。此试剂盒中的荧光染料可单独或配合使用。

注：TSA 荧光染料反应液 =Tyramide-480 荧光染料+TSA buffer；其中 Tyramide-480 荧光染料：TSAbuffer=1：200；Tyramide-480 荧光染料与TSA buffer的稀释比例可以根据具体情况灵活调整优化，最佳范围为1:50--1:400（1:200大部分情况能得到最佳结果）；一般建议若一抗孵育时间常温1h-3h内，建议稀释比例1:50-1:200, 若一抗孵育时间4度过夜，建议稀释比例1:200-1:400或更高

【仪器参数】