【产品简介】
蛋白分子量标准,常称为蛋白marker,是蛋白电泳及免疫印迹实验不可或缺的工具。蛋白marker不仅提示蛋白电泳是否正常进行,也能够简单判断转膜是否成功。非预染蛋白Marker(8-265 kD)是由14种纯化的蛋白混合而成,其中8,25,50kDa条带加粗,用于SDS-PAGE蛋白质电泳的分子量准确测定。本品以Biorad1610363(10-250kDa),Thermo26614(10-200kDa),Thermo26632(3.4-100kDa)为参考标示。本品可通过考马斯亮蓝或银染法在SDS-PAGE中显示,适合作为SDS-PAGE的蛋白质分子量标准,可用于预染蛋白marker的表观分子量标定。
【产品详情】
【使用方法】
1 将本产品于室温或则冰上融化后,轻柔混匀,使沉淀充分溶解(切勿煮沸加热);
2 吸取3-5 μL到SDS-聚丙烯酰胺胶的上样孔中,电泳;
3 电泳结束后,通过蛋白染色观察本marker和样本条带。
【储液成分】
20mM Tris-H3PO4, pH7.5;2 mM EDTA;2 % (W/V) SDS;15 % (W/V) Glycerol;2mM DTT;4mM Urea;0.1% (V/V) Proclin300;0.01% Bromophenol blue
【注意事项】
1 本品为即用型产品,融化后直接吸取即可,使用前无需加热、还原或添加样品缓冲液。
2 每次吸取都要使用灭过菌的枪头或干净的针头,用完马上盖严,避免引入蛋白酶使产品降解。
3 建议分装保存,避免反复冻融。
4 转膜缓冲体系中SDS不要超过0.02-0.04%。
【常见问题】
问题1 Marker所有条带一定会都跑出来吗?
回答1 不一定。实际电泳中,所见条带数比说明书上条带数少1-2条是有可能的,由于电泳时间不足、凝胶浓度偏低等因素造成。给出的建议是,目的蛋白附近的marker条带清晰可见即可,或者溴酚蓝前沿刚跑出胶的时候再停止电泳。
问题2 Marker的条带变宽怎么解决?
回答2 如果是上样量过多引起的,减少上样量即可;溶解不完全,在上样前充分溶解。
问题3 为什么有时候有些条带会消失?
回答3 凝胶浓度过低可能会导致小分子量条带分散,凝胶浓度过高则可能会导致高分子量条带分散。检査产品有效期和储存条件,失效的产品可能会不稳定,出现褪色或缺失条带。确保产品未经加热或煮沸。
问题4 预染蛋白marker可以用来准确预估蛋白分子量大小吗?
回答4 不可以。预染marker中每个蛋白质均与染料共价结合,这些染料可能会导致marker中蛋白在不同缓冲系统、不同凝胶中有相似但不相同的迁移速率。如需准确预估分子量,建议使用非预染marker。