产品简介

植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧（ROS），ROS活性非常大且极其不稳定，因此ROS的检测通常因其最终产物而定。过氧化氢是活性氧的一种。在过氧化氢酶的催化下，过氧化氢能与DAB（3,3-二氨基联苯胺四盐酸盐）迅速反应生成棕红色化合物，从而定位组织中的过氧化氢。 DAB染色液(1mg/mL,pH3.8)由DAB和磷酸盐组成，用于植物活组织中的过氧化氢染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色，染色后有过氧化氢聚集的部位呈棕色至深棕色。

自备试剂

1、新鲜的植物叶片或根、自来水、蒸馏水、95%乙醇 2、超声波、磁力搅拌器、电子天平、量筒、滤纸、照相机 3、DAB染色样本保存液(可选)

使用方法

1、试剂准备：将100 mg DAB加入到100 mL磷酸缓冲液中充分溶解，即得DAB染色工作液，4℃避光保存，一周内有效；-20℃保存，可适当延长保质期。注：DAB对光敏感，溶解过程需要避光，如果较难溶解，可通过超声、磁力搅拌等方法促溶。 2、样本准备：采集经胁迫（例如重金属）的植物幼苗或根尖，自来水稍洗净，置于滤纸上吸干多余的水分。 3、染色：将植物幼苗或根尖浸没在DAB染色工作染液中，常温避光染色2~6 h，至阳性部位出现深棕色，其余部位近无色或者呈植物本身的颜色即可。（根据植物幼嫩程度和显色程度调整染色时间） 4、脱色：用镊子将植株幼苗或者叶片小心取出，浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次，置于滤纸上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃处理3~16 h，目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素，脱色期间可多次更换新鲜的95%乙醇。 5、观察：用镊子取出植株幼苗或者叶片，浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次，置于滤纸上吸干多余水分后，拍照。（吸干水分后可将样本转入DAB染色样本保存液中浸泡30 min，样本可置于该保存液中常温保存一周。）

技术资料

-

注意事项

1、 DAB染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一周内使用。存放时间过久，会影响显色。 2、因过氧化氢容易分解，且任何外在因素都可能刺激植物应激产生过氧化氢，因此植物样本需要新鲜采集，并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组。 3、样本染色完成后尽快拍照保存结果。 4、DAB可能具致癌性，请小心操作，避免直接接触。 5、染色和脱色步骤也可参考如下建议操作：组织放入染液中，抽真空，-0.1MPa保持负压20~30min，再于室温下静置染色60min，弃染色液；加入95%乙醇，于70~80℃水浴锅脱色，每隔10min换一次95%乙醇，待样品绿色全部褪去后可停止脱色。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 7、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。