甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类,这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色，甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色；另外肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用Toluidine Blue O Stain(1%,磷酸盐法)对软骨细胞和肥大细胞进行染色。

自备试剂

1、蒸馏水或去离子水、系列乙醇、冰乙酸、丙酮 2、二甲苯或环保脱蜡透明液、中性树胶

使用方法

(一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液5～30min。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水，二甲苯或脱蜡透明液透明，封固。 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、石蜡切片入二甲苯2次，每次15min。 2、系列乙醇各1min，自来水洗2min。 3、入Toluidine Blue O Stain浸染10～15min。 4、自来水洗2min，滤纸吸干水分，丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 5、逐级乙醇脱水，二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封固。 染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (三)细胞涂片染色 1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液,一般要求稀释到0.1%即可。 2、细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定15s，取出放在纸巾上。 3、滴加1～2滴稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、10～15s后将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去，无需干燥，直接镜检。 染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。

技术资料

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注意事项

1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。 【储存条件及期限】 室温避光，常温运输，一年有效。