1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着 CO₂ 的固定，同时又制约着碳素向 Calvin 循环和光呼吸循环分流，其活性直接影响着光合速率。
本试剂盒检测原理是在 Rubisco 的催化下，1 分子的核酮糖-1,5-二磷酸（RuBP）与 1 分子的 CO₂ 结合，产生 2 分子的 3-磷酸甘油酸（PGA）；PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着 NADH 氧化生成 NAD⁺；在 340 nm NADH 有特征吸收峰，而 NAD⁺ 没有此吸收峰，测定 340 nm 吸光度下降速率可以代表 Rubisco 的羧化酶活性。
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