【产品概述】
糖原(Glycogen)是动物细胞合成的葡萄糖分枝状聚合物,用于能量储藏和释放。是淀粉类似物,结构与支链淀粉类似,用作二次长期储能。用作核酸沉淀的载体物质。一种惰性载体,能明显提高乙醇沉淀法中提取DNA和RNA的回收率。糖原不溶于乙醇,形成捕获目的核酸的沉淀。离心后形成肉眼可见沉淀,从而使得处理沉淀下来核酸变得更为方便。与传统的tRNA辅助沉淀法相比,糖原从稀释溶液中沉淀核酸量效率更高。另外,由于糖原本身不含DNA或RNA,用其沉淀所得的核酸更适合用于后续的PCR、RT-PCR以及内切酶等核酸酶反应。
【产品组成】
本品为糖原溶液,浓度为10mg/ml,不含DNase和RNase。适用于DNA或RNA沉淀用的辅助沉淀剂,通常每0.8~1μL糖原(10mg/ml)可把pg级的DNA或RNA从100μL溶液体系中沉淀出来。
【使用方法】
1. 往DNA溶液中加入1/10体积的3M乙酸钠(或2M氯化钠,或5M乙酸铵)。
2. 加入糖原(10mg/ml)使其终浓度为0.02~1mg/ml。
注:糖原的工作浓度请参考文献或特定的操作说明进行。对于寡核苷酸,建议工作浓度不要超过1mg/ml。
3. 加入1倍体积的异丙醇(或2.5倍体积的乙醇)到溶液内,轻轻混匀。<200bpDNA片段需用乙醇。
4. 于-20℃孵育混合物60min,或-70℃孵育30min。更长的孵育时间和更低温度能产生更好的核酸回收率。
5. 10,000rpm离心混合物10~15min。
6. 吸走上清。
7. 用70%冰乙醇清洗沉淀。
8. 晾干沉淀。避免过度晾干沉淀,否则需花费更长时间来溶解。
9. 用不含核酸酶的水或TE buffer来溶解DNA。
【注意事项】
1. 对于单次用量比较少的用户,建议收到本品第一次使用时,小量分装冻存,减少反复冻融次数。
2. 有文献报道,经糖原沉淀的连接反应产物,几乎不会干扰后续的细菌转化。糖原(1μg/ml)不会抑制TdT活性,糖原(<2mg/ml)几乎不会影响反转录酶活性,糖原(0.02mg/ml)不会抑制T4 RNA连接酶活性。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。