T4 DNA Ligase(Fast) 由携带 T4 噬菌体 gene 30的大肠杆菌产生。该酶催化双螺旋 DNA 或 RNA 之间的 5'- 磷酸基团和 3'- 羟基之间形成磷酸二酯键。该酶在双链 DNA、RNA 或者 DNA/RNA 复合物间可修复单链缺刻 , 并且可以连接有粘性末端或者平末端的 DNA 片段，但对于单链核酸无活性，主要用于限制性内切酶酶切产物 DNA 片段克隆、基因定点突变与 PCR 产物克隆、修复双链 DNA 缺刻与线性 DNA 自环化。T4 DNA Ligase(Fast) 需要 ATP 作为辅助因子，在室温下完成粘性末端连接反应仅需10分钟。

 酶活单位定义

37℃条件下，1 Weiss unit 的酶在 20 min 内催化 1 nmol 的 [³²PPi] 转变为活性炭吸附态。1 Weiss unit 等同于约 200 个粘性末端连接反应单位（CEU），相当于在 16℃条件下，30 min 内连接 50% HindIII 消化后的 λDNA 片段。

酶活检测条件

酶活在如下反应混合物中进行测试：66 mM Tris-HCl (pH 7.6)，6.6 mM MgCl₂，0.066 mM ATP，10 mM DTT，3.3 μM [³²PPi]。