内切酶BsmBI

【产品介绍】

内切酶BsmBI属于Type IIs型限制酶，可识别非回文序列，并在识别序列之外进行切割，常用于Golden Gate组装。经过优化的反应Buffer使BsmBI最大限度发挥功能，同时反应缓冲液包含重组白蛋白，其可增强多种酶的稳定性。

【识别序列】

CGTCTC(1/5)

【酶切位点】

5'...C G T C T C (N)₁↓...3'

3'...G C A G A G (N)₅↑...5'

【保护碱基】

Not Determined

【同裂酶】

Esp3I

【反应温度】

55°C。在37°C进行酶切反应时，有50%的活性。

【随酶Buffer】

专用Buffer C，不兼容其它缓冲液

【失活条件】

80°C, 20 min

【甲基化敏感性】

Dam: no effect.；Dcm: no effect.；CpG: some blocked.；EcoKI: no effect.；EcoBI: impaired.

【超长时间温育检测】

最适反应温度下，将10 U BsmBI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

【使用方法】

1 DNA快速酶切流程

1.1 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

注：DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响酶活性

1.2 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

1.3 55°C温育15 min-1 h，一般推荐5 U-10 U酶/μg质粒DNA、10U-20U/酶/μg基因组DNA，温浴 1 h；如需过夜酶切反应，请将酶量调整至1 U；

1.4 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）；

2 注意事项

2.1 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2.2 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

3 小体积反应体系

注：为避免蒸发，10 μl反应体系的孵育时间不应超过1 h。