内切酶SspDI

【产品介绍】

内切酶SspDI属于常规限制酶系列，可识别G^GCGCC序列。SspDl需要较长时间酶切以实现DNA底物的完全切割，但该酶仍使用圣尔通用酶切Buffer，可实现双酶切。

【识别序列】

G/GCGCC

【酶切位点】

5'...G ↓ G C G C C...3'

3'...C C G C G ↑ G...5'

【保护碱基】

Not Determined

【同裂酶】

KasI

【异裂酶】

DinI, EgeI, EheI, Mly113I, NarI, PluTI, SfoI

【反应温度】

37°C

【随酶Buffer】

10×圣尔通用酶切Buffer；10×圣尔Color Buffer

【失活条件】

80°C, 20 min

【甲基化敏感性】

Dam: no effect.；Dcm: no effect.；CpG: blocked.；EcoKI: no effect.；EcoBI: no effect.

【超长时间温育检测】

最适反应温度下，将10 U SspDI与1 μg pBR322共同温育16 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。

【使用方法】

1 DNA酶切流程

1.1 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

注：DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响酶活性

1.2 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

1.3 37°C温育1-16 h；

1.4 80°C温育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）；

【注意事项】

1 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

【缓冲液兼容性】