【产品概述】

链霉亲和素磁珠（3 μm）由超顺磁性微球与高纯度链霉亲和素共价结合而成。对生物素系统具有极高的结合亲和力。能够快速、高效、灵敏、特异性地与生物素标记的分子结合及磁性分离。应用包括单链DNA模板制备、RNA和DNA结合蛋白分离、大分子DNA片段固定、产物纯化测序，以及核酸特异性捕获，可针对自动化流程轻松灵活调整。

【微珠属性】

适用范围  IP、co-IP、纯化

磁珠浓度  10 mg/mL

磁珠直径  3 μm

适用抗体种属  分离生物素化蛋白、DNA及PCR产物

蛋白载量  结合能力 ≥800 pmol 生物素/mg磁珠

耐受高温  不耐高温

配基  链霉亲和素

【试剂准备】

注意：使用前在Lysis buffer、Wash buffer或IP&co-IP裂解、结合、清洗buffer（圣尔#SB-IP011）中添加适量的蛋白酶抑制剂。

【使用说明】

1 磁珠准备

1.1 根据样本数取适量磁珠并去除上清。用移液器轻轻吹打，以充分重悬链霉亲和素磁珠。取20-100 μL 置于1.5 mL离心管中待用。使用前置于磁力架上静置1分钟，去上清。

1.2 洗涤磁珠。加入1×TBS至最终体积为约0.5 mL，用移液器轻轻吹打重悬链霉亲和素磁珠。然后置于磁力架上静置10秒，去除上清。重复该步骤2次。

1.3 根据后续的实验目的，用适量溶液重悬链霉亲和素磁珠。

1.4 (RNA相关应用，可选)在上述洗涤后，用0.5 mL DEPC处理过的0.05 M NaCl 洗涤磁珠2次,每次2分钟。然后再用0.5 mL DEPC 处理过的0.1 M NaCl 洗涤一次。去除上清后，根据后续的实验目的，按照初始体积的量，用适当溶液重悬链霉亲和素磁珠。

2 生物素标记核酸的结合和洗脱

2.1 磁珠重悬。用2倍原始磁珠体积的Binding & Washing Buffer I(2×)重悬磁珠。

2.2 核酸吸附。加入等体积的用超纯水配制的生物素标记核酸样品，充分振荡混悬，置于旋转混合仪上，室温孵育10 - 30分钟或4°C孵2 小时。

2.3 磁性分离。将离心管置于磁力架上静置1分钟，去除上清。

2.4 洗涤。取1 mL Binding & Washing Buffer I(1×)加入磁珠中，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于磁力架上静置1 分钟，去除上清。再重复洗涤1-2次。

2.5 、洗脱。加入100 μL 或适量的 DNA/RNA Elution Buffer，65°C孵育5分钟或 90°C孵育2分钟。

3 生物素标记抗体或蛋白的结合和洗脱

3.1 抗体或蛋白吸附。加入适量用Washing Buffer II (1×)稀释的生物素标记抗体、蛋白、抗原抗体复合物或蛋白复合物，充分振荡重悬磁珠，置于旋转混合仪上，室温孵育30 - 60分钟或4°C孵育4 - 16小时。

3.2 磁性分离。将离心管置于磁力架上静置1分钟，去除上清。

3.3 洗涤。取1 mL的 Washing Buffer II (1 ×)加入分离得到的磁珠中，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。重复洗涤步骤3-4次。

3.4 洗脱。根据目的分子的特点及后续实验，可选酸性洗脱或变性洗脱，其它合适方法进行洗脱。

酸性洗脱：每个样品加入100μL 或适量Protein Elution Buffer，混匀后置于旋转混合仪上，室温孵育5分钟。然后置于磁力架上分离1分钟，将上清转移到新的离心管中。洗脱液置于4°C待用，或者-20°C长期保存。

变性洗脱：SDS-page Loading Buffer或0.1% SDS洗脱。每个样品加入100μL 或适量的1 × SDS-page Loading Buffer或0.1% SDS，95°C加热10分钟。置于磁力架上分离1分钟，取上清用于SDS-page电泳或Western Blot检测等。

【注意事项】

1 严禁冻结。

2 密闭保存，避免干燥，保持微珠浸于储液。

3 本品为悬液，使用前需充分混匀，微珠彻底悬浮后吸取，使用过程中避免高速离心。

4 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，强烈建议在蛋白样品、Lysis buffer、Wash buffer中都添加适量的蛋白酶抑制剂。细胞裂解物可置于-80°C下长期保存。

5 裂解核蛋白，可在PIPA（强）裂解液中加入1mg/mL DNaseI、2.5 mM MgCl₂、蛋白酶抑制剂和1 mM PMSF。

6 在结合反应过程中，微珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象。

7 当目标蛋白分子量大小为50 kD或者25 kD时，建议更换轻链抗体/重链抗体，或使用纳米抗体磁珠，以尽量减少变性重链或轻链对SDS-PAGE和WB结果产生的干扰。

8 质控取样点1：样本充分裂解后，取数十微升样本，记作Input，即为反应前样本；质控取样点2：样本免疫沉淀孵育结束后，取上清样本10-50 μL，记作supernatant，即为上清样本。

9 缓冲液最大兼容性：1mM DTT（二硫苏糖醇）；3 M 脈盐•HCI；8 M 尿素；2 M NaCl；2% NP-40；1% SDS；1% Triton X-100

【常见问题】

问题1 目标条带较弱/没有

可能原因：样品降解，需添加蛋白酶抑制剂，所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融；抗体浓度太低，需增加抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度；抗体亲合力太低，选用适合于IP/co-IP的相应抗体。

问题2 背景太高

可能原因：在无血清培养液中裂解细胞；在免疫沉淀前增加微珠预洗、免疫沉淀后增加漂洗次数和严谨度（高盐或去垢剂，如在第二次洗涤的步骤中增加NaCl浓度到500 mM）；改用高严谨度裂解液；使用洁净的仪器或液体；不要接触WB的膜转移面。

问题3 杂带较多

可能原因：磁珠的非特异性结合，或者样本上样量过高、或者抗体浓度过高。建议实验前对微珠增加漂洗，实验过程中增加洗涤次数，使用合适的样品和抗体浓度。

本产品仅供科研使用。