【产品介绍】

纯化自蛋清（egg white），不含DNase、RNase和Protease，可以用于以质粒抽提、蛋白纯化等为目的的细菌裂解。

【试剂准备】

推荐酶液浓度 10 mg/mL(即4 kU/10μL)

推荐使用量  100 μL处理1 g湿菌（即40 kU处理1 g湿菌）

推荐缓冲液 50 mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)，10 mmol/L EDTA，100 mmol/L NaCl

【实验步骤】

细菌的裂解，在实验室中通常使用酶溶法结合机械破碎法，下面介绍两种方法的实验步骤。

1 酶溶法：

1.1 收集菌体：100 mL细菌培养液，4°C，5000 rpm 离心15 min，弃上清，约每克湿菌加3 mL裂解缓冲液，悬浮沉淀。

1.2 每克菌加100 μL溶菌酶（母液10 mg/mL）及8 μL PMSF（母液50 mM），搅拌20 min

1.3 37°C，玻棒搅拌，溶液变得粘稠时加每克菌20μL DNase I（母液1 mg/mL），室温放置至溶液不再粘稠。

2 超声破碎法：声频为15-20 kHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎，在处理少量样品时操作简便，液体量损失较少，同时还可对染色体DNA进行超声剪切。

2.1 收集1 L待裂解的菌，40 °C，5000rpm离心，15 min；弃上清，约每克湿菌加3 mL TE缓冲液。

2.2 按超声处理仪厂家提供的功能参数进行破菌；10 000×g离心，15 min，分别收集上清液和沉淀。

2.3 分别取少量上清和沉淀，加入等体积的2×凝胶电泳加样缓冲液，进行SDS-PAGE。

2.4 注意事项：超声破碎与声频、声能、处理时间、细胞浓度、菌种类型等因素有关，应根据具体情况掌握；超声波破菌前，标本经3-4次冻溶后更容易破碎。

【注意事项】

1 此溶菌酶主要对细菌类有作用，此溶菌酶不能完成对酵母的裂解。

2 超声破碎法不适合用于基因组提取。

3  增加溶菌酶的浓度，如高达 10 mg／ml，能更快的溶解细菌，用更高的浓度甚至在 4℃ 作用 5 min 即可获得满意的溶解。

4  虽然酶溶法有选择性释放产物、核酸泄出量少、细胞外形完整等优点，但它也存在明显不足：如酶价格高、通用性差、有时存在产物抑制。