细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的；细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察，这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。 吖啶橙(Acridine Orange，AO)属于三环杂芳香染料，能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色荧光，荧光发射峰为530nm；溴化乙锭(Ethidium Bromide，EB)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA发出橘红色荧光，荧光发射峰为610nm。染色后，凋亡细胞呈染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构；非凋亡细胞核呈荧光深浅不一的结构样特征；二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。

自备试剂

1、荧光显微镜、低速离心机、细胞计数板、载玻片、盖玻片 2、PBS

使用方法

1、收集细胞，用PBS清洗细胞1次，加入适量的PBS重悬细胞，计数并调节细胞浓度至(0.2~5)×106/ml。 2、配制AO/EB工作液：取适量的试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，按照试剂(A)：试剂(B)：试剂(C)=1：1：8的比例稀配制成AO/EB工作液。 3、每25~50μl细胞悬液中加入AO/EB工作液2μl，混合均匀，室温孵育5~15min。 4、取洁净载玻片，滴加上5~10μl细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。 5、在荧光显微镜下进行观察。

技术资料

活细胞 绿色荧光 死细胞 橙色荧光

注意事项

1、用能通过活细胞膜与DNA结合后发蓝色荧光的Hoechst33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的Propidium Iodide对细胞进行双染的方法也比较常用。 2、如有低温离心机进行离心效果更佳。 3、操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。 4、EB Solution有一定毒性，请小心操作。 5、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 【储存条件及期限】 4℃避光保存12个月，常温运输。