产品简介

植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧（ROS），ROS活性非常大且极其不稳定，因此ROS的检测通常因其最终产物而定。超氧阴离子是活性氧的一种，属于一种含氧自由基，能将NBT（氮蓝四唑）还原成不溶于水的蓝色甲瓒化合物，从而定位组织中的超氧阴离子。 植物超氧阴离子染色液(NBT,pH7.4)根据上述基本原理也称为NBT染色法，用于植物活组织中的超氧阴离子染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色，染色后有超氧阴离子聚集的部位呈蓝色至深蓝色。

自备试剂

1、新鲜的植物叶片或根、自来水、蒸馏水、95%乙醇 2、超声波、磁力搅拌器、电子天平、滤纸、照相机

使用方法

1、试剂准备：将50 mg NBT加入到100mL磷酸缓冲液(pH 7.4) 中充分溶解，即得NBT染色工作液，4℃避光保存，一月内有效。注：如果较难溶解，可通过超声、磁力搅拌等方法促溶。 2、样本准备：采集经胁迫（例如重金属）的采集植物幼苗或根尖，自来水稍洗净，置于滤纸上吸干多余水分。 3、染色：将植物幼苗或根尖浸入NBT染色工作液中，常温避光浸染2~6 h，至阳性部位出现深蓝色，其余部位为淡蓝色或近无色或呈植物本身的颜色即可。（根据植物幼嫩程度。显色程度调整染色时间） 4、脱色：用镊子将植物幼苗或者叶片小心取出，浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次，置于滤纸上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃处理3~16 h，目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素或者淡蓝色背景，处理期间可多次更换新鲜的95%乙醇。 5、观察：用镊子取出植株幼苗或者叶片，浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次，置于滤纸上吸干多余水分后，将样本转入适量NBT样本保存液中浸泡30 min后，随后可取出拍照。样本可置于该溶液中常温保存一周。

技术资料

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注意事项

1、 NBT染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一月内使用。存放时间过久，会影响显色。 2、因任何外在因素都可能刺激植物应激产生超氧阴离子，因此植物样本需要新鲜采集，并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组。 3、样本染色完成后尽快拍照保存结果。 4、染色和脱色步骤也可参考如下建议操作：组织放入染液中，抽真空，-0.1MPa保持负压20~30min，再于室温下静置染色60min，弃染色液；加入95%乙醇，于70~80℃水浴锅脱色，每隔10min换一次95%乙醇，待样品绿色全部褪去后可停止脱色。